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血液中乙醇含量顶空进样气相色谱法测定
时间:2014-07-21 点击次数:1960

【分析目的】建立检测血液中乙醇含量简便、准确的方法。方法 以叔丁醇作为内标,用顶空气相色谱火焰离子化检测器对样品进行检测,与平行操作的乙醇标准品比较,用内标法以乙醇对内标物的峰面积比进行定量。结果 色谱图上目标峰与内标峰分离完全,在0.01~10.0 g/L范围内标准工作曲线线性关系良好。结论 顶空气相色谱法测定血液中乙醇含量快速灵敏,能准确定量。该方法可用于实际检测分析。
血液中乙醇浓度的高低,是判定一个人清醒程度的重要指标。目前国内大多采用国标法测定,即重铬酸钾氧化硫酸亚铁铵滴定法。该法花费时间长,条件不易控制。由于血液中含有各种蛋白质和胶状物质,比较黏稠,因此不能采用直接气相色谱法测定。本实验采用顶空气相色谱法,通过对待检血样进行适当处理和色谱条件的摸索,从而对实验方法有所改进。

1  材料和方法

1.1  主要仪器  滕州中科谱分析仪器有限公司GC-2020型气相色谱仪,半自动顶空进样器,N2000色谱工作站,氮氢空发生器一体机。

1.2  试剂  空白抗凝血,无水乙醇(色谱纯),叔丁醇(色谱纯,内标物)。

1.3  试剂配置

1.3.1  乙醇标准储备液、叔丁醇标准储备液  用移液器分别准确吸取无水乙醇1.26 ml(相对密度0.7893)、叔丁醇1.24 ml(相对密度0.803 7)于100 ml容量瓶中,用重蒸水稀释至刻度,混匀,分别得浓度为10 g/L的乙醇标准储备液、叔丁醇标准储备液。置4℃冰箱保存(可保存1年)

1.3.2  乙醇标准工作液、叔丁醇标准工作液  分别吸取一定量的乙醇标准储备液和叔丁醇标准储备液,用蒸馏水稀释10倍,分别得浓度为1 g/L的乙醇标准工作液和叔丁醇标准工作液

1.4  色谱条件和顶空条件  色谱柱 毛细管色谱柱,柱温80℃,检测室温度220℃,进样温度200℃. 顶空样品温度80℃,阀体温度90℃,样品管路温度90℃。

1.5  样品制备  吸取2份待测全血0.5 ml,分别加入样品瓶中,加100 μl(1 g/L)叔丁醇标准工作液作为内标,用密封钳加封铝帽,密封好瓶塞,混匀,放入DK-300顶空进样器加热位里面。

另取空白全血2份,根据待测血液中乙醇含量的多少(目测乙醇峰面积的大小),添加相应的乙醇标准工作液(20 μg~2 mg),内标液按上述方法平行操作,作为已知对照。

样品检测  按下顶空进样按键,仪器自动负压吸取样品进气相色谱分析,同时顶空进样器给色谱工作一个采样信号,色谱工作站开始记录色谱数据。每个试样进样2次。
  标准曲线的制作  将10 g/L的乙醇标准储备液用重蒸水分别稀释10、100、1000倍,得浓度分别为1、0.1、0.01 g/L的乙醇标准液,然后分别取0.05、0.1、0.2、0.4 ml的1 g/L乙醇标准液,0.1、0.2 ml的0.1 g/L乙醇标准液,0.1、0.2 ml的0.01 g/L乙醇标准液,同时加入0.2 ml的1 g/L叔丁醇标准工作液做内标,检测后制作标准工作曲线。见表1。
记录与计算  记录检材及已知对照中乙醇及内标峰面积值,填入GC定量分析记录表中,并计算出各检材中乙醇及内标的平均峰面积。表1  标准工作曲线相关数据 乙醇添加量理论计算的乙醇浓度根据表1的数据,计算标准曲线的回归方程及相关系数:y=1.4062x+0.0268,r=0.999

计算检材中醇含量W(g/100 ml)

W=f×检材中的醇峰面积平均值×内标添加量(μg)×100检材中内标峰面积平均值×检材量×1000

f=空白检材中醇添加量×内标峰面积平均值空白检材中内标添加量×醇峰面积平均值

计算相对相差(用来检验平行操作的稳定性及数据的可靠性):

相对相差(%)=|W1-W2|W×100

式中W1、W2为2份检材平行定量测定的结果,W为2份检材平均值。


结  果
测定的色谱图  见图1、2。

 

该条件下目标峰与内标分离完全,(3.39±0.5)min处为乙醇目标峰,(10.0±0.5)min处为内标峰。

2.2  线性关系  在确定的zui佳试验条件下,对不同浓度的乙醇标准工作液进行测定,其回归方程为y=1.4062x+0.0268,r=0.999。在乙醇浓度为0.01~10.0 g/L范围内,血液中乙醇含量与相应的峰面积值呈良好的线性关系,测定限为0.01 g/L。

如有需要测定血液中乙醇含量可

滕州中科谱分析仪器有限公司

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