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国产便捷式液相色谱仪在药物分析中的应用和局限性

2018-10-25

国产便捷式液相色谱仪应用于复杂体系快速分析所表现出的优势, 已引起了药物分析工作者的重视。

国产便捷式液相色谱仪在药物分析领域的几个应用:
化学药品的分析
在针对药物合成的分析方面, UPLC 可实现随时快速准确检测合成过程中的中间体、副产物或降解产物等。
生化药品的分析
利用HPLC和UPLC 分析经柱前衍生化处理后的蛋白质水解物中氨基酸。结果表明, 两种方法的结果基本一致, 但UPLC的分析时间仅为HPLC 的40% 。
中药成分的分析
中药含有大量的生物碱, 通常为中药的活性成分, 研究这类成分具有重要意义。在采用HPLC 法分析生物碱时, 由于固定相表面残余硅羟基的影响, 此类化合物色谱峰的保留行为会发生变化, 造成色谱峰严重展宽和拖尾, 因而在分析时常需要在流动相中加入添加剂, 如离子对试剂、有机胺类等,用以屏蔽固定相表面残余硅羟基的作用, 但这些添加剂的加入往往会给LC- MS 联用带来不便。部分 UPLC 填料, 减少了固定相表面残余硅羟基, 因而在分析生物碱类样品时, 流动相中只加入酸抑制剂, 不需添加有机胺即可使其获得良好的分离。由于在流动相中避免了有机胺及盐的加入, 可以在一定程度上降低质谱噪音、减少对质谱的污染, 且使用的流速适合与质谱直接联用, 无需分流, 可以进一步提高检测灵敏度。
药物代谢动力学研究
药物代谢动力学涉及药物在肌体内吸收、分布、代谢和排泄过程的研究, 包括药物及其在各种复杂基质(全血、血浆、尿、胆汁及生物组织)中代谢物的分离、结构鉴定以及痕量分析测定。肌体的体液系统中存在大量的保留时间相同、相对分子质量也相同的干扰组分; 而目前药物研制日趋低剂量, 使常规的分离检测技术难以满足复杂介质中痕量成分准确定量的要求。能否在复杂的体液系统中快速检测和鉴定出药物的代谢产物, 依赖于高效的色谱分离和灵敏的高分辨质谱技术的联用。采用UPLC - MS联用技术进行药物代谢及药物动力学研究, 体现了其高灵敏度和高专属性特点, 而且能够同时测定样品中复方制剂的多组分浓度, 实现样品高通量分析。
国产便捷式液相色谱仪的局限性
1、与国产便捷式液相色谱仪匹配的色谱柱比较少
UPLC 是应小粒径(小于2μm )柱填料的需求而专门设计的耐高压液相色谱系统, 因此使用小粒填料的色谱柱能够最大限度地发挥UPLC 高分离度和高灵敏度的优势。但是这种色谱柱要能够耐受由于粒径减小而带来的高反压,而且粒径的减小也给色谱柱充填技术带来了挑战。
2、峰面积的重复性欠佳
UPLC分析样品时峰面积的重复性略逊于HPLC, 特别是低浓度样品时更加明显, 其峰面积重复性的RSD 约为HPLC的2倍。研究者认为, 可能因UPLC的进样量过少(仅有2μl) , 或者由于采用了半环( partia l loop)进样的方式, 理论上这种进样方式的精密度不如全环( fuIl lop)进样。通过稀释样品, 增加注入样品的体积,可以改善这种状况。
3、对高频检测仪器的需要
UPLC分离样品色谱峰扩展很小, 通常峰底宽度只有几秒钟, 低浓度的样品峰则更窄。使用UPLC 测定低浓度样品时, 准确度、精密度都比较差。这可能是由于检测仪器探测频率比较低, 检测低浓度样品时出现了样品点的遗漏。因此, 随着UPLC 的开发应用, 必将推动高频检测仪器的进一步发展。

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