1溶剂的纯化

在液相色谱分析中,正相色谱以已烷作为流动相的主体,二氯甲烷、氯仿、乙醚作为改性剂;反相色谱以水作为主体,以甲醇、乙腈、四氢呋喃作为改性剂。hplc分析均应使用hplc级纯度的溶剂,ar级的溶剂可能会由于杂质的存在而出现鬼峰。

正相色谱分析中使用的己烷、二氯甲烷、氯仿、乙醚中经常含有微量的水分,这会改变液固色谱柱的分离性能,使用前应用球形分子筛柱脱去水分。反相色谱分析中使用的甲醇、乙腈、四氢呋喃,不必脱除微量水,但甲醇、乙腈等使用前经硅胶柱净化,去除具有紫外吸收的杂质。

要保证配制流动相用水的纯度足够高。由于去离子水通常含有一些有机物,所以不适合用于hplc分析用,使用超纯水(电阻率18mω. cm)。如果条件有限,可将去离子水再次蒸馏,现用现蒸,保持新鲜,还能脱去co2,使用效果也不错。

2缓冲溶液

有些分析需要用到缓冲盐的流动相,配制时盐试剂要用ar级以上、没有污染、过期;现用现配,不要储存时间过长,避免ph值发生变化和成分分解, 影响色谱分离的效果。缓冲盐的流动相能在实验室自己配制,商品化的流动相可能会添加有硫代硫酸钠稳定剂,会影响缓冲液的光学和色谱性能。

3过滤

无论是有机水溶液还是缓冲盐溶液的流动相,配好后都要通过0. 45μm滤膜过滤后再上机使用,这样能够有效防止由于微粒的存在使流路管道堵塞。过滤后应把溶剂放在密闭容器中,以防止被重新污染。过滤后的溶液既可用于 色谱分析,也可用于清洗诸如泵头、柱塞杆、单向阀和密封圈等仪器部件,保持输液泵的性能良好。

4脱气

所有的流动相在进入hplc系统之前都应该首先脱气(即使仪器上有在线脱气),因为没有脱气的流动相进入到高压系统后,存在的气泡会导致系统的 流速和压力不稳定,出现鬼峰等问题。从溶液中排除气泡的方法主要有:真空脱气、氦气脱气和超声波脱气,实际工作中真空抽滤的方法很有效,它既能脱气又能过 滤,但必须在上机前完成。在线连续脱气可以防止气体随温度的变化重新溶解在溶剂中。

5流动相的化学特性

流动相一般不要使用强酸或强碱溶液。因为ph值过高或过低会损坏输液泵中的密封圈和柱塞杆,除非流路需要钝化(用2mol/l的硝酸溶液),也应用后立即用纯水冲净。

在使用含水较高的流动相时,应注意不同色谱柱使用方面的限制,因为传统的烷基键合固定相在有机溶剂含量低于5%的流动相中容易发生碳链断裂。一些新型键合固定相可以在纯水为流动相的条件下使用。

等度液相色谱分析仪的验收指标

1.流量正确度：设置流量为1.0mL/min，用一个干燥的10mL容量瓶（称重好的）接留出液，一接开始记时，正确装满10mL停止。再往称量，得到水的重量。水的重量除时间即是流量正确度。

2.流量精度：照流量正确度连续测定几次计算RSD。

3.检测器基线噪声：停留活动相一个小时，选择响应zui大的峰为结果。

4.检测器基线漂移：停留活动相一个小时，从开始到结束看上下漂移zui大的为结果。

5.重现性：做整台仪器的重现性，用甲醇做活动相，工程师带的色谱柱、标准品，反复进样几次测试峰面积的RSD。

6.进样量正确度：分别进20、40、60、80、100uL看线性。

7.交叉污染：进一个标准品后在进个空缺看污染情况。